导读:(1)单侧光能引起生长素向背光的一侧横向运输,导致背光一侧生长素浓度大于向光一侧.生长素横向运输发生在尖端,但不能通过载玻片,所以图中A、B、C、D四块琼脂块中生长素的含量情况为A>C﹦D>B.(2)去除尖端的胚芽鞘不能生长,所以将ABCD
(1)单侧光能引起生长素向背光的一侧横向运输,导致背光一侧生长素浓度大于向光一侧.生长素横向运输发生在尖端,但不能通过载玻片,所以图中A、B、C、D四块琼脂块中生长素的含量情况为A>C﹦D>B.
(2)去除尖端的胚芽鞘不能生长,所以将ABCD四块琼脂块分别置于去掉尖端的胚芽鞘上,一段时间后,测量胚芽鞘的高度.结果应为四个胚芽鞘均生长,它们的高度是A>C﹦D>B.
(3)若把甲组放在匀速旋转的圆盘上,光照保持不变,则胚芽鞘的尖端受光均匀,则生长素的分布也是均匀的,所以含量状况为A等于B.
(4)重力和单侧光照是引起生长素分布不均匀的重要因素,其中单侧光照也是植物向光性形成的原因.
故答案为:
(1)A>C﹦D>B
(2)实验设计:取四个相同的去除尖端的胚芽鞘,把A、B、C、D四块琼脂块分别置于去除尖端的胚芽鞘上,经过一段时间后,测量并比较四个胚芽鞘的高度.
实验结果:四个胚芽鞘均生长,它们的高度是A>C﹦D>B.
(3)等于
(4)重力 单侧光照 向光性
流式细胞仪技术
流式细胞仪技术,主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光,经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点,当每个细胞经过焦点时,发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置),光检测器把散射光定量转化成电信号,经数字转换器进行数字化后而成整数,然后进行电子存储,以后数据可以调出显示和进行分析。其优点如下:
1、具有操作简便,只要将染色的单个细胞推入仪器中,就会得出数据。
2、具有较高的灵敏度及测定速度,而且每次可测出许多数据,一般情况下,每秒可测5000个细胞,能迅速分析和记数大量细胞,并能准确统计群体中荧光标记细胞的比例。
3、应用广泛,即可用于测定细胞活力、繁殖周期和细胞定型分析,也可区别死亡细胞、分裂细胞和静止细胞群,既可测定DNA和RNA、测凋亡峰,又可测蛋白含量,特别是胞浆蛋白。
一、样品的制备
流式细胞仪是测定一个或重复的每个颗粒经光路的信号,因此,细胞必须做成单个细胞悬浮状态,不能聚集,也不允许有细胞碎片存在。所用染料必须特异(如特异单抗),而且不允许渗透至载液中。
标本如果是属于淋巴细胞等血细胞、骨髓细胞或白血病细胞系或类淋巴细胞系,要经Ficoll分离,作单细胞分离处理,但若为实体组织或贴壁生长的上皮成纤维样细胞,需采用酶消化法(胰蛋白酶、胶原酶等),化学法(EDTA、EGTA和柠檬酸盐)消化分散液或洗液更好用无钙、镁PBS,柠檬酸盐的浓度为40μmol/L,并同时采用机械分散法,将经消化处理的膨松组织,用玻璃珠悬摇或用吸管吹打分散均可,用PBS洗2~3次后重悬,更好过一下尼龙或不锈钢网筛100μm和20μm。细胞浓度要保证在1-2×106/mL
若标本用于测定单个细胞,需加入1~5 mg/L的DNAase,将有助于阻止破碎细胞释放的DNA造成细胞再聚集,但是若分离的细胞要作DNA含量测定之用时,则切勿加DNAase。
二、悬浮细胞的固定
上述制备的活细胞即可用于流式细胞仪分析,如果染色和流式分析要拖后进行,或为了提高染色效果,则要将细胞预固定。乙醇固定是常用的 *** 。
1、固定 *** :
(1)甲醛法:在细胞悬液中加入等量的8%甲醛(用Hank"S液配)4℃下固定12-18小时。
(2)乙醇法:细胞悬于PBS中,缓慢加入-20℃预冷的95%乙醇,使终浓度为70%,冰浴30分钟。
(3)丙酮法:于细胞悬液中,缓慢加入冷丙酮,使终浓度为85%。
2、实例:
(1)用预冷的无钙、镁含05mmol/L EDTA的磷酸盐缓冲液,将细胞制成1×106细胞的悬液。
(2)在4℃下逐滴加入3倍体积的95% 乙醇,连续搅拌使乙醇终浓度达70%。
126
(3)该细胞可在4℃下保存数日。
(4)分析前先用1000r/min离心10分钟,弃去乙醇,再将细胞悬于PBS中或要求的试剂中。
三、流式细胞仪分析的应用
(一)非染色细胞的光散射
一个粒子(如细胞)出现在一束光线中,立即会干扰该光束,造成该光束入射光的重分布,该细胞所获能量则以衍散、折射、反射等复杂的参数形式重新发射出来,这些参数与细胞体积、表面构象、内部结构形成函数关系,可测低角前面约10°的光散射及90°的光散射。
一般认为,90°位置的光散射值主要受细胞内部结构所致的光反射和折射影响,而低角前面10°位置的光散射则主要代表细胞大小。光散射测量 *** 如下:
(1)将细胞悬浮于HBSS中,浓度介于1×106~2×106/mL浓度之间。
(2)以悬浮细胞平衡盐溶液(HBSS)充满含鞘液的细胞贮藏池。
(3)设定细胞流量为500个/S(秒),以获得更佳测定结果。
(二)染色法
1 细胞的碘化丙锭(propiolium iodide PI)染色
PI和EB(溴化乙锭)为同类物质,与EB一样,PI嵌入DNA双螺旋中,可使荧光强度增加约20倍,PI的荧光强度约为EB染色的18倍,以488nm波长激发,DNA/PI复合物更大的发射波长约为615nm。
11 小鼠Lewis肺癌细胞(3LL)DNA含量测定 ***
(1)从C57BL/6小鼠上切除肿块,在培养皿内用PBS冲洗;
(2)去除结缔组织及脂肪,剪碎肿块;
(3)小碎片移入120×38mm注射针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中。
(4)将200~300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL),染色3LL细胞,于4℃存放20~30分钟。
(5)测定580~750nm之间的发射荧光,以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分。
注:PI染色液:01%柠檬酸钠1000mL+PI5mg+1%Nonide P40水。
12 培养细胞DNA的流式细胞仪分析
(1)从培养皿中吸去培养基,以HBSS冲洗二次;
(2)加入PI5mL于培养皿中,在4℃放10分钟;
(3)用吸管反复次打细胞,使细胞破坏,胞核释放出来,再行流式细胞仪分析。
13 完整细胞DNA的PI染色
(1)70%乙醇固定的细胞悬液,离心,去固定液;
(2)室温条件下加入PI染色一批细胞(10~10细胞/mL),时间为30分钟,然后行流式细胞仪分析。
14 光辉霉素和PI的DNA染色
在荧光抗生素光辉霉素和PI联合染色过程中,光辉霉素的供体分子被PI的受体分子接受产生能量转移,该染色技术主要用于实体肿瘤组织, *** 细胞及妇科标本,同时 127 56
也适用于体外培养的细胞。
(1)分离制备的细胞悬液即可使用,若用70%乙醇固定可保存一周。
(2)以PI/光辉霉素染色,4℃1小时(PI为10 mg/L、光辉霉素为10 mg/L)。
(3)染色后进样,以100W汞灯作为激光光源,使用BG123nm阻断滤片,叠加K590型高通滤法(one seep filter)。
2、DNA和RNA的鉴别染色
利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA。吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定,非固定细胞核酸,或作溶酶体的一种标记。观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体。虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果,但该 *** 已被许多实验室广泛采用。 *** 如下:
(1)试剂:
溶液A:低温保存,稳定期约2周。
Triton X-100(01%) 01mL,1mol/L HCL 8mL
1mol/L NacL 15ml蒸馏水76mL,PH15(100mL)
溶液B:稳定期数月,更好除菌以后(高压或过滤)贮存。
001mol/L EDTA10mL,1mol/L Nacl15mL
04mol/L Na2HPO4 315mL,02mol/L柠檬酸185mL
蒸馏水24mL,总体积为99mL pH60
吖啶橙母液:
用吖啶橙/蒸馏水配成1mg/mL(致癌物,应小心),吖啶橙应用液01mL母液加99mL溶液B稀释。
注意:仪器鞘流系统应保持4℃。
氩激光激发波488nm,红色荧光为DNA(F>600nm),绿色荧光为RNA或单链DNA(F>530nm)
(2) ***
①用含15%血清的PBS配制细胞悬液,取02mL(8×106细胞/mL),加入04mL溶液A,4℃放置45~60秒。
②加12mL含吖啶橙的溶液B,室温2分钟。
③应在加入溶液B后10分钟内进流式细胞仪分析。
注意:①细胞数保持恒定;②核酸与吖啶橙的比例;③染色时间及温度。
(三)染色法的应用
1、变性及双链DNA的鉴别染色
(1)试剂:
HBSS内含1000u/mL RNA酶A,02mol/L KCl pH135
吖啶橙用01mol/L柠檬酸配成5 mg/L(167μm),02mol/L Na2HPO4缓冲液,pH26。
①2×10细胞悬于1mL HBSS/RNase液中。
②37℃温育1小时。
③将02mL细胞悬液(含4×105细胞始终悬浮于HBSS/RNase)与05mL 02mol/L KCl(pH135)混匀,20℃ 30分钟。
128 6
④加2mL吖啶橙染色2分钟。
⑤绿色荧光(530nm)和红色荧光(600nm)分别代表细胞中单链及双链DNA含量。
2、DNA与癌基因探针双标记测定
这种测定是先用癌基因探针按间接免疫荧光染色法标记癌基因表达产物,然后用PI标记DNA,现以研究白血病细胞增殖与癌基因的关系说明操作步骤:
(1)制备白血病细胞悬液,用100%甲醇在-20℃固定10分钟。
(2)取50μl50 mg/L的癌基因探针Y13-25(它是一种广谱单克隆抗体,可特异性地直接与N-ras,Ki-ras和Ha-ras三种癌基因编码的21Kd蛋白相结合),4℃作用30~45分钟。
(3)用PB离心洗涤2次,重悬浮于50μL HBSS中(含01%叠氮钠和2%小牛血清)。
(4)加入50μL 1:200兔抗鼠IgG,4℃放置30~45分钟。
(5)同(3)洗涤后加入50μL 1:40的FITC标记的羊抗兔IgG,4℃反应30~45分钟。
(6)同(3)洗涤后,细胞用RNA酶消化,室温20~30分钟。
(7)同(3)洗涤后,用PI染液染20分钟。
(8)同(3)洗涤后,用488nm激发波长测定。FITC染色显示ras癌基因表达产物,PI染色显示DNA含量。
注意事项:
①制备样品时,离心次数不宜过多,防止细胞丢失和凝集;
②细胞固定时间不宜过长,不要用冰醋酸、乙醇、苦咪酸及汞固定剂;
③为了降低本底,应将细胞表面未结合的荧光染料洗净;
④进行双标记沉淀时,应尽量选用激发光谱不接近的荧光色素。
3、以溴化脱氧尿嘧啶(Brdu)和Hoechst33258染料进行细胞周期分析。
(1)试剂:
用培养基配制33 mg/L Brdu及脱氧细胞苷264g/mL。
染色液:Hoechst33258溶于PBS,细胞染色24小时后进行分析,据报道染色的稳定时间在30分钟至24小时之间。
(2) *** :
①将Brdu溶液按1:10加入细胞培养液中。
②根据细胞周期时间不同,选择不同时间培养的细胞。
③孵育后,摇散细胞以传代培养。
④直接用染液重悬细胞,进入流式细胞仪分析。
Hoechst33258荧光值在410~580nm之间,需用330~360nm紫外光激发。应特异性结合腺嘌呤-胸腺嘧啶碱基对。因此,不仅特异性标记DNA,亦可标记胸腺嘧啶。在细胞周期分析时,在与细胞孵育过程加入Brdu,Brdu可替代DNA中的胸腺嘧啶,因此,处于合成期内的细胞表面上仍保持二倍体状态,并在分裂后G1峰的半峰处产生一新峰,此项
技术可用于直接测定细胞G2期及分裂时间。
4、Hoechst33342染色活细胞DNA
(1)试剂:Hoechst 33342,用蒸馏水配成025mol/L。
(2) *** :
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①制备106/m细胞悬液,以Hoechst33342染色,浓度为5~10 mg/L ,室温下20分钟。
②分析前切勿洗涤细胞。
Hoechst33342可用作细胞DNA的活体染料,据信可在保持细胞活性的同时,呈现出相当好的DNA化学计量关系,激发波在紫外范围350~363nm之间,发射波则在450nm处。
5、以异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyante FIFC)染色蛋白质。
(1)试剂:异硫氰酸荧光素(FIFC)用含40 mg/L RNase的PBS配成01~10 mg/L浓度。
(2) *** :
①染色前用终浓度70%乙醇固定细胞,至少18小时。
②离心固定细胞,弃去固定液。
③室温下用FIFC染色细胞蛋白,30分钟。
④流式细胞仪分析,使用氩激光,激发波长488nm,荧光发射波长515~535nm。 也可于固定细胞中,以18 mg/L (01%柠檬酸盐配制)和005 mg/L FIFC(含40 mg/L RNase,PBS配制)染色20分钟以上可对DNA和蛋白质双重染色,分别呈现红色荧光(DNA)和绿色荧光(蛋白质)。
6、荧光素抗体的应用
该技术既可用于检测带有特异性膜抗原的细胞,可用荧光素或若丹明标记单克隆抗体处理上述细胞;也可用于测定胞浆中的蛋白质(如凋亡BCL-2蛋白,抗病毒蛋白MXA等),后者在细胞凋亡章节中已介绍从略。
用磷酸盐缓冲液Eagle"s MEM稀释FIFC连接的抗体内含01%叠氮钠、2%牛血清。为判定FIFC抗体的最适度的稀释浓度,向微量滴定板的细胞中加入50μL不同浓度的稀释液,再以荧光显微镜确认更佳染色浓度。使用抗人LEU-I抗体分析时,应稀释成5 mg/L或 025 mg/L。无论鼠或人细胞在2×10浓度时其存活率应在90%以上。
*** :
(1)于微量滴定板加入50μL抗体稀释度,再加入50μL细胞悬液,混匀。
(2)冰浴45分钟,离心滴定板(1500r/min 10分钟)。
(3)弃上清,以培养基100μL洗涤细胞沉淀2次,每次洗涤后用1500r/min 10分钟,弃上清。
(4)以1ml预冷的培养基配成1×106细胞/mL的已染色细胞悬液,进样前持续保持冷环境(4℃)。
目前流式细胞仪(FCM)已在各学科中获得应用。
①细胞生物学:定量分析细胞周期并分选不同细胞周期时相的细胞;分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表达产物等物质与细胞增殖周期的关系,进行染色体核型分析,并可纯化X或Y染色体。
②肿瘤学:DNA倍体含量测定是鉴别良、恶性肿瘤的特异指标。近年来已应用DNA倍体测定技术,对白血病、淋巴瘤及肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多种实体瘤细胞进行探测。用单克降抗体技术清除血液中的肿瘤细胞。
130 7
③免疫学:研究细胞周期或DNA倍体与细胞表面受体及抗原表达的关系;进行免疫活性细胞的分型与纯化;分析淋巴细胞亚群与疾病的关系;免疫缺陷病如艾滋病的诊断;器官移植后的免疫学监测等。
④血液学:血液细胞的分类、分型,造血细胞分化的研究,血细胞中各种酶的定量分析,如过氧化物酶、非特异性酯酶等;用N *** 及DNA双染色法可研究白血病细胞分化成熟与细胞增殖周期变化的关系,检测母体血液中Rh(+)或抗D抗原阳性细胞,以了解胎儿是否可能因Rh血型不合而发生严重溶血;检测血液中循环免疫复合物可以诊断自身免疫性疾病,如红斑狼疮等。
⑤药物学:检测药物在细胞中的分布,研究药的作用机制,亦可用于筛选新药,如化疗药物对肿瘤的凋亡机制,可通过测DNA凋亡峰,Bcl-2凋亡调节蛋白等。
2 匀浆的制备
剪碎法:取心肌组织05g放人平皿,用含EDTA的冷PBS缓冲液洗涤。加入少量PBS,用眼科剪将组织剪至匀浆状,加入10 ml PBS;用吸管吸取组织匀浆,用200目尼龙网过滤到试管内;离心沉淀1500 prm×3 min,弃上层。再用PBS洗3次,每次以500 prm短时低速离心除去细胞碎片,以300目尼龙网过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10/ml。
研磨法:先将组织在200目滤网上研磨,并加入PBS过滤;所得的细胞悬液,2000 prm×5 min,吸去上清,加PBS 1 ml,轻轻吹打成细胞悬液,调整细胞浓度为5×10~10个。再2O00prm×5 min,吸去上清,加PBS 1 ml,轻轻吹打成细胞悬液,经300目滤网过滤,再离心、加PBS吹打,重复2~3次后,调整细胞浓度为 106/ml。
3 流式细胞仪检测细胞凋亡—Annexin V/PI双染色法
Annexin V/PI标记染色:取500u1心肌缓冲液,轻轻混匀细胞后加5ul FITC一Amexin V和5ul PI试剂,置冰浴10min后,流式细胞仪(光源为488nm氨离子激光,预先用Flow-Check调整光路)计数10以上的细胞,用FITC/PI双色分析程序测得心肌凋亡细胞(Annexin V+/PI—)的百分率。
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要分析扫描电镜的形貌特征,包括尺寸、均匀度和取向,通常需要使用图像处理和分析工具。以下是一些可能的步骤和 *** :
图像预处理:
噪声去除:使用滤波技术来去除图像中的噪声。
对比度增强:调整图像的对比度以突出细节。
亮度和色彩校正:确保图像质量一致,以便进行准确的分析。
尺寸分析:
标定尺度:通过已知尺寸的标志物(例如,栅格标记)来确定图像中的比例尺。
测量工具:使用图像处理软件中的测量工具来测量对象的尺寸。这些工具通常可以绘制线段、多边形或圆形来测量长度、面积和直径等参数。
均匀度分析:
灰度分析:将图像转换为灰度图像,并使用灰度直方图来了解亮度分布。
纹理分析:应用纹理分析 *** ,如灰度共生矩阵或局部二值模式,来评估图像中的纹理均匀性。
取向分析:
方向性滤波:使用方向性滤波器(例如,Sobel、Gabor滤波器)来检测图像中的特定方向性特征。
霍夫变换:用于检测图像中的直线或曲线的方向和位置。
方向直方图:计算图像中不同方向的梯度直方图,以获取取向信息。
统计分析:
收集数据:根据分析需要,收集尺寸、均匀度和取向的相关数据。
统计指标:计算统计指标,如平均值、标准差、方差、偏度和峰度,以描述特征的分布和变化。
可视化:
创建图表:使用图表工具绘制直方图、散点图或箱线图,以可视化数据分布和关系。
图像叠加:将测量结果叠加到原始图像上,以更直观地展示分析结果。
进一步分析:
根据具体研究目标,可能需要进行更复杂的分析,如形状分析、聚类分析或机器学习 *** ,以识别和分类不同的形貌特征。
需要注意的是,分析扫描电镜的形貌特征可能需要根据具体图像和研究目标来选择合适的 *** 和工具。此外,图像处理和分析是一个广泛的领域,需要有相关领域的知识和技能才能进行准确的分析。
1输入数据。按照spss软件数据输入的规则,编号输入在之一列每个编号组有几个数据,就输入几个重复的编号,比如本例子每组4个数据,则按序输入4个1,2,3,4
2修改数据的小数点位数及增加数据标签。点击界面下方的“变量视图”,然后在“小数”这一栏修改小数点位数;在“值”这一栏按下图二的例子增添数据标签。
3分析。点击“数据视图”中的分析,然后选择”比较平均值“中的”单因素ANOVA“开始分析。
4设置。将代表数据组的编码导入”因变量列表“栏,将代表处理的编码导入”因子“栏;点击“选项”,勾选”方差同质性检验“,点击“继续”进入下一步。
5结果分析。完成以上操作后,结果如下图(其中df表示自由度,平均值平方即均方),结果显示F值为20571。我们将这一数值与显著性水平的F进行比较,若大于显著性的F值,那么P则小于该显著性的概率,例如在例子中,F>F(005),那么P<005,说明处理间差异显著;或直接看表中的显著性,通过显著性下结论。
拓展知识:
试验中要考察的指标称为试验指标,影响试验指标的条件称为因素,因素所处的状态称为水平,若试验中只有一个因素改变则称为单因素试验,若有两个因素改变则称为双因素试验,若有多个因素改变则称为多因素试验。
方差分析就是对试验数据进行分析,检验方差相等的多个正态总体均值是否相等,进而判断各因素对试验指标的影响是否显著,根据试验指标的个数可以区分为单因素方差分析、双因素方差分析和多因素方差分析。
在方差分析中,我们将要考察的对象的某种特征称为试验指标,影响试验指标的条件称为因素,因素可分为两类,一类是人们可以控制的(如原材料、设备、学历、专业等因素);另一类人们无法控制的(如员工素质与机遇等因素)。
下面所讨论的因素都是指可控制因素。每个因素又有若干个状态可供选择,因素可供选择的每个状态称为该因素的水平。如果在一项试验中只有一个因素在改变,则称为单因素试验;如果多于一个因素在改变,则称为多因素试验。
因素常用大写字母A,B,C,…来表示,因素A的水平用 来表示,下面对单因素试验进行讨论
参考资料:
单因素方差分析_
https://baikebaiducom/item/%E5%8D%95%E5%9B%A0%E7%B4%A0%E6%96%B9%E5%B7%AE%E5%88%86%E6%9E%90/10700964fr=aladdin
你好,这东西没人会预测。
如果真会预测,早就成为百万富翁了。
预测这东西我早就不信了,上一回在网站上,看别人预测,结果买了,连一个号码都没对上。
楼主真要买,就权当是献爱心吧。
每天都买相同的号码,哪一天善有善报,就让你买中了。
PS:这东西号码一般不会连续几天重复,因此,你今天的号码更好不要和昨天的中奖号码太相似。
,谢谢
拉曼光谱分析中为什么有荧光?
1、从本质上来讲,荧光光谱是电子态的跃迁,而拉曼光谱是振动态的跃迁。分子吸收电磁辐射的能量后,电子会从基电子态向能量较高的能态跃迁,跃迁所需的能量与吸收的光子能量相等。
2、简单来说,拉曼就是光散射后发生的频率改变。荧光则是分子吸收能量再由于碰撞释放能量产生的。
3、换个激发波长最直接,安东帕1064或者紫外区的激光,波长越短越好,200多nm的,不过短波长的很难找得到,1064可以用安东帕的,1064拉曼应该更成熟一些。
4、对用可见光激发的系统,荧光都是一个头痛的事情,将激发波长移至紫外或近红外区域很可能解决或减少此类问题。实验室里有太多的室内光源比如荧光、白炽灯或日光灯等,这会在测试光谱上出现不必要的背景信号。
5、—分子相互作用,要比红外吸收光谱的强度弱很多。但是由于它产生的机理是电四极矩或者磁偶极矩跃迁,并不需要分子本身带有极性,因此特别适合那些没有极性的对称分子的检测。联系:拉曼光谱和红外光谱都发生在红外区。
6、拉玛纳桑不理解这一现象,把它看成是由于杂质造成的二次辐射,和荧光类似。因此,在论文中称之为“弱荧光”。然而拉曼不相信这是杂质造成的现象。如果真是杂质的荧光,在仔细提纯的样品中,应该能消除这一效应。
wb条带分析1、打开ImageJ软件导入WB条带:File→Open→找到WB条带把转化成灰度:Image→Type→8-bit。
2、根据蛋白质表达量分析。wb就是艾滋病抗体确证试验,主要是监测env的条带,只要出现两个env条带,就可以判定是阳性,所以主要是检测env条带。wb条带粗细深浅表示蛋白质表达量,所以粗细深浅根据蛋白质表达量分析。
3、如果你拿到的是蓝色的条带,如下图:那我们就需要变个色,弄成黑白的。然后 *** 成待发表用的。当然有些小伙伴现在用化学发光仪曝光的,WB条带就是黑白的,处理起来就方便一点。
wb不同胶怎么进行统计分析一般分析是用方差分析、T检验。统计分析是指运用统计 *** 及与分析对象有关的知识,从定量与定性的结合上进行的研究活动。
建立多个变量之间线性或非线性数学模型数量关系式的统。非参数检验是统计分析 *** 的重要组成部分,它与参数检验共同构成统计推断的基本内容。
取出胶片立即完全浸入显影液中1~2min,清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影,清水冲净晾干,标定Marker,进行分析与扫描。WB中常见的问题以及处理办法。
QuantityOne根据这个Stripe可以动态的对整张的背景进行剪影。比如泳道起始处光密度低,那么QuantityOne在此处的剪影值也降低;随着Stripe向前延伸,光密度值逐渐升高,QuantityOne也同样不断加大剪影的强度。
可以重新测一下灰度值,调整一下。WB一般是压三张片子,可以用其他压的浅的或者压的深的替换一下当前条带,再测一下灰度。
wb结果是看面积还是深浅1、颜色深浅。WB数值化 *** 灰度分析计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别。在做单抗的WB时,最终显色后,是根据条带颜色深浅判断。灰度值越小物体颜色越深。
2、wb条带粗细深浅表示蛋白质表达量,所以粗细深浅根据蛋白质表达量分析。蛋白质表达量是包含蛋白质的聚集体形态、单体形态和含有fc的片段的加和值。
3、就HIV的病原学确诊来讲,它是优选的用于确定HIV抗原的确定实验 *** ,WB的检验结果经常被做为辨别别的检测方式好坏的金标准。
4、在局部WB结果中,条带之外本应是空白的背景也会有较深的颜色,对剖析结果会产生干扰,而且结果图不美观,难以用于文章发表。这种问题的可能缘由有以下几点:①封锁不充沛。
5、WB:磁通量。设在磁感应强度为B的匀强磁场中,有一个面积为S且与磁场方向垂直的平面,磁感应强度B与面积S的乘积,叫做穿过这个平面的磁通量,简称磁通。标量,符号“Φ”。
western结果怎样统计分析一般分析是用方差分析、T检验。统计分析是指运用统计 *** 及与分析对象有关的知识,从定量与定性的结合上进行的研究活动。
如果样品量充分,可以先检测内参,观测样品间内参显色条带是否一致,根据差异大小调整各样品的上样量重新进行WesternBlotting实验,至内参量一致为止;若内参一致,即可进行不同样品间目的蛋白表达变化分析。
westernblot结果的分析是一个主观性比较强的过程western是一个半定量的实验。所以一般是作为定性的验证试验首先要分析的就是有无目的蛋白的条带,有无条带就是一个定性的结果,这种分析是比较简单。
一般就是方差分析、t检验之类的我替别人做这类的数据分析蛮多的。统计学是通过搜索、整理、分析、描述数据等手段,以达到推断所测对象的本质,甚至预测对象未来的一门综合性科学。
个人认为,其实western是一个半定量的实验,最后的胶片上显示的条带就是给出一个最直观的结果,而对其灰度值的量化不外乎是在肉眼可见的基础上在给出一个数值的参考而已。
我们可以在“Image-Invertdata中将色彩进行反转,然后便可以用QuantityOne进行分析了文字注释:QuantityOne提供基本的文字注释功能。您可以在您的电泳上记录您的分析结果比如电泳条带的分子量、光密度值、物质的量等等。
wb三次结果怎么统计分析可以重新测一下灰度值,调整一下。WB一般是压三张片子,可以用其他压的浅的或者压的深的替换一下当前条带,再测一下灰度。
一般分析是用方差分析、T检验。统计分析是指运用统计 *** 及与分析对象有关的知识,从定量与定性的结合上进行的研究活动。
在百度上搜索ImageJ软件然后下载到电脑上安装完毕。安装好ImageJ软件后,将你做的WB的片子进行扫描,得到扫描版。
首先要分析的就是有无目的蛋白的条带,有无条带就是一个定性的结果,这种分析是比较简单。当然这其中还要综合考虑内参等对照样品。
QuantityOne的电泳条带分析功能---高斯建模与结果分析现在我们已经完成了泳道识别、背景去除、条带识别的任务。接下来我们要对Bands进行一些处理,然后就可以进行最终的结果分析了。
点击Analyze-Measure或者用快捷键Ctrl+M,就可以获得该条带的IntDen值了。最后,重复用工具框选择第二个/第三个条带并且Ctrl+M,就可以获得这三个条带的灰度值了,将结果导出到Excel或GraphPad来进行统计分析及作图。
对应分析也称关联分析、R-Q型因子分析,通过分析由定性变量构成的交互汇总表来揭示变量间的联系。对应分析法是在R型和Q型因子分析的基础上发展起来的一种多元统计分析 *** 。 下面我们主要从下面四个方面来解说:
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实际应用
理论思想
建立模型
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分析结果
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一、实际应用
对应分析法 可以揭示同一变量的各个类别之间的差异,以及不同变量各个类别之间的对应关系 。当所涉及的 分类变量类别较多或者分类变量的个数较多 的时候,我们就需要用到对应分析。主要应用在市场细分、产品定位、地质研究以及计算机工程等领域中。原因在于,它是一种视觉化的数据分析 *** ,它能够将几组看不出任何联系的数据,通过视觉上可以接受的定位图展现出来。
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二、理论思想
由于指标型的因子分析和样品型的因子分析反映的是一个整体的不同侧面,因此它们之间一定存在内在的联系。如果能够有效利用这种内在联系所提供的信息,对更全面合理地分析数据具有很大的帮助。在因子分析中,如果研究的对象是样品,可采用Q型因子分析;如果研究的对象是变量,则需采用R型因子分析。但是,因为这两种因子分析 *** 必须分别对样品和变量进行处理,所以这两种分析 *** 往往存在着相互对立的关系,为我们发现和寻找它们的内在联系制造了困难。而对应分析通过一个过渡矩阵Z将两者有机地结合了起来。 对应分析的基本思想是将一个联列表的行和列中各元素的比例结构,以点的形式在较低维的空间中表示出来。 首先,给出指标变量点的协差阵A=Z,Z和样品点的协差阵B=ZZ’,由于两者有相同的非零特征根,所以可以很方便地借助指标型因子分析而得到样品型因子分析的结论。如果对每组变量选择前两列因子载荷,那么两组变量就可以画出两个因子载荷的散点图。由于这两个图所表示的载荷可以配对,于是就可以把这两个因子载荷的两个散点图画到同一张图中,并以此来直观地显示各行变量和各列变量之间的关系。
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三、建立模型
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数据条件:
[if !supportLists]§ [endif]不能用于相关关系的假设检验
对应分析案例:
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题目:费希尔在1940年首次介绍列联表资料时使用的是一份关于眼睛颜色与头发颜色的调查研究数据。该研究数据包含了5387名苏格兰北部的凯斯纳斯郡的小学生的眼睛颜色与头发颜色,如下表所示。试用对应分析 *** 研究眼睛颜色与头发颜色之间的对应关系。
一、数据输入
二、操作步骤 1、进入SPSS,打开相关数据文件,因为本例中是以频数格式录入数据的(相同取值的观测只录入一次,另加一个频数变量用于记录该数值共出现了多少次),所以进入SPSS后,首先要对数据进行预处理,以频数变量进行加权,从而将数据指定为该种格式。选择“数据”|“个案加权”命令。首先在“个案加权”对话框的右侧选中“个案加权系数”单选按钮,然后在左侧的列表框中选择“频数”进入“频率变量”列表框。单击“确定”按钮,完成数据预处理。
2、选择“分析”|“降维”|“对应分析”命令。先定义行变量及其取值范围,即在“对应分析”对话框的左侧选择“眼睛颜色”进入右侧的“行”列表框,然后单击下方的“定义范围”按钮,在“最小值”中输入“1”,“更大值”输入“4”,单击“更新”按钮,最后单击“继续”按钮返回“对应分析”对话框。利用同样的 *** 定义列变量及其取值范围。列变量选择“头发颜色”,设置“最小值”为“1”,“更大值”为“5”。
3、其余设置采用系统默认值即可。单击“确定”按钮,等待输出结果。
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四、结果分析
1、对应分析表下表是按照原始数据整理而成的行列表,反映的是眼睛颜色和头发颜色不同组合下的实际样本数。
2、对应分析摘要在下表中,之一列是维度,其个数等于变量的最小分类数减1,本例中的最小分类数是眼睛颜色的种类(为4类),所以维度是3;第2~5列分别表示奇异值、惯量、卡方值和显著性;随后的列给出了各个维度所能解释的两个变量关系的百分比,容易发现,前两个维度就累计解释了996%的信息。
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、对应分析坐标值及贡献值下表给出了行变量(眼睛颜色)和列变量(头发颜色)在各个维度上的坐标值,以及各个类别对各维数的贡献值。以本表上部分概述行点为例,对表中各列含义做一下简要说明。 “ 数量”列表示各种类别的构成比 ,如深色眼睛的人占总数的构成比例是0244。 “维得分”列表示各类别在相关维数上的评分 ,首先给出的是默认提取的两个维数上各类别的因子负荷值。 “惯量”列给出了总惯量(023)在行变量中的分解情况,数值越大表示该类别对惯量的贡献越大。“点对维的惯量”表示在各个维数上,信息量在各类别间的分解状况 ,本例中之一维数主要被深色、蓝色、浅色所携带,也就是说这3个类别在之一维数上的区分比较好,第二维数主要被深色、棕色、蓝色所携带,说明这3个类别在第二维数上的区分比较好。 “维对点的惯量”表示各类别的信息在各维数上的分布比例 ,本例中深色、蓝色、浅色都主要分布在之一维数上,棕色主要分在第二维数上。 “总计”表示各维数的信息比例之和 ,可见红色这一类别在前两位中只提出了803%的信息,效果最差。
4、对应分析图下表是对应分析图,是对应分析中最主要的结果,从图中可以看出两个变量不同类别之间的关系。我们可以从两个方面来阅读本图:一方面可以分别从横坐标和纵坐标方向考察变量不同类别之间的稀疏,如果靠得近,则说明在该维数上这些类别之间差别不大;另一方面可以把平面划分为以(0,0)为原点的4个象限,位于相同象限的不同变量的分类点之间的关联较强。容易发现本例中:棕色头发和棕色眼睛,深色头发、黑色头发和深色眼睛,金色头发和蓝色眼睛、浅色眼睛存在着比较强的联系。
分析结论: 通过分析,我们可以知道:由结果分析1可知,眼睛颜色和头发颜色在不同组合下的实际样本数。由结果分析2可知,提取的前两个维数累计就已解释了996%的信息。由结果分析3可知,眼睛颜色和头发颜色在各个维数上的坐标值,以及各个类别对各个维数的贡献值。由结果分析4可知,棕色头发和棕色眼睛,深色头发、黑色头发和深色眼睛,金色头发和蓝色眼睛、浅色眼睛存在着比较强的联系。
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原文来自 https://mpweixinqqcom/s/Bt4IzRvcDRAtHKUtmuO57w